RT-PCR

полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой

Вариант метода полимеразной цепной реакции polymerase chain reaction, модифицированный для анализа молекул РНК, - на первом этапе метода на матрице тестируемой молекулы мРНК с использованием фермента обратной транскриптазы reverse transcriptase получают одноноцепочечную кДНК, которую затем амплифицируют стандартным ПЦР-методом; внедрение метода RT-PCR позволило изучить мРНК, присутствующие в клетках в очень небольшом количестве, - например, мРНК белков факторов роста в ранних эмбрионах и др.; в настоящее время для этих целей используют термостабильные ДНК-полимеразы, обладающие обратно-транскриптазной активностью (например, синтезируемую Thermus thermophilus).

* * *

Обратных транскриптов полимеразная цепная реакция, кДНК-ПЦР, РНК-ПЦР — процедура амплификации РНК in vitro с использованием ретровирусной обратной транскриптазы или термостабильной Therminus thermophilus (Tth) ДНК-полимеразы для получения кДНК на матрице РНК. кДНК затем амплифицируется методом обычной ПЦР. Tth-обратная транскриптаза катализирует как обратную транскрипцию в присутствии MnCl₂, так и амплификацию образовавшейся кДНК в присутствии MnCl₂. Более того, ее каталитическая активность не снижается при повышении реакционной температуры с целью дестабилизации вторичной структуры РНК и эффективного отжига праймера. Т.обр., при использовании Tth-фермента все реакции можно осуществить в одной пробирке. РНК-ПЦР позволяет амплифицировать кДНК с очень малых количеств очищенных иРНК, тРНК, рРНК и вирусных РНК, а также обнаруживать специфические РНК при очень малом количестве копий, поэтому метод применяется для анализа экспрессии генов на уровне РНК. РНК-ПЦР-метод можно использовать также и для одновременного изучения трансляции генов in vitro.